05 Hernández + Fernández - Upload a Document to Scribd

Acta zoológica lilloana 51 (1): 57–66, 2007 57 Proteínas integrantes de los oligómeros de caseínas en la leche de tres especies de mamíferos: cabra, venado de las pampas y elefante marino Hernández de Sánchez, Marcela 1 2 1 y Francisco Fernández 2 Fundación Miguel Lillo. Miguel Lillo 251, Tucumán. Esta dirección de correo electrónico está protegida contra los robots de spam, necesita tener Javascript activado para poder verla Facultad de Ciencias Naturales e IML. Esta dirección de correo electrónico está protegida contra los robots de spam, necesita tener Javascript activado para poder verla R E S U M E N — “Proteínas integrantes de los oligómeros de caseínas en la leche de tres especies de mamíferos: cabra, venado de las pampas y elefante marino”. Las caseínas de la leche se presentan en forma de complejos proteicos denominados micelas. En la leche bovina la kcaseína integra polímeros de diferentes tamaños unidos por puentes disulfuro que cubren la superficie de la micela. El objetivo del presente estudio fue determinar mediante cromatografía de partición y electroforesis la composición de los mencionados oligómeros en la leche de tres especies: venado de las pampas (Ozotocerus bezoarticus), elefante marino (Mirounga leonina) y cabra (Capra hircus). La separación cromatográfica, en Sephacryl S-200, mostró picos que variaban en número según la especie. Los oligómeros de caseínas eluyeron en el primer pico, según se demostró mediante electroforesis en geles de poliacrilamida en ausencia y presencia de agentes reductores, mientras que en los restantes picos se encontraron formas de menor peso molecular: monómeros y dímeros. Las características y la composición de los oligómeros son diferentes en las distintas especies en lo que respecta a pesos moleculares, cantidad relativa de κ-Cn y α-Cn y participación de proteínas no-caseínicas. Al parecer las diferencias observadas entre las especies en estos aspectos no tienen influencia sobre la formación de las micelas ni la estabilidad de las mismas. PALABRAS CLAVES: Lactoproteínas, caseínas, micelas, oligómeros, cabras, elefante marino, venado de las pampas. A B S T R A C T — “Proteins that make up casein oligomers in the milk of three mammalian species: goat, pampas deer, and sea elephant”. Milk caseins form protein structures named micelles. In bovine milk the k-casein forms polymers of different sizes joined by disulphide bonds coating the surface of the micelle. The aim of the present study was to determine, through chromatographic separation and electrophoresis, the composition of these oligomers in the milk of three mammalian species: Ozotocerus bezoarticus , Mirounga leonina and Capra hircus. Chromatographic separations showed several peaks which varied in number depending on the species. The casein oligomers eluted in the first peak, as was demonstrated when using poliacrilamid gels in electrophoresis in the absence and presence of reducing agents, whereas in the remaining peaks, forms of lower molecular weight were found: monomers and dimmers. The characteristics and composition of the oligomers are different in each species with respect to molecular weight, relative quantity of κ-Cn y α-Cn, and the participation of non-caseinic proteins. It would seem that the observed differences among species with respect to these characteristics do not affect the formation of the micelles nor its stability. KEYWORDS: Lactoproteins; caseins; micelles; oligomers; goat, sea elephant, pampas deer. INTRODUCCIÓN Las caseínas constituyen un grupo de fosfoproteínas de función nutritiva que se encuentran en la secreción láctea de todos los mamíferos (Jensen, 1995; Jenness, 1982; Fernández y Saad, 1999). Se presentan en forma de complejos proteicos denominados micelas para cuya conformación se han propuesto Recibido: 01/10/07 – Aceptado: 15/02/08 varios modelos. El más aceptado es el que ubica a la αs1-caseína, αs2-caseína y β-caseína en el interior y a la κ-caseína en el exterior de las micelas. Ello se basa en que, por ser la κ-caseína la única que está glicosilada, lo que le confiere carácter hidrofílico, mantiene en solución a todo el conjunto micelar (Sood y Slattery, 2001; Phadungath, 2005). Se ha visto que una cierta proporción de la κ-caseína 58 M . H e r n á n d e z d e S á n c h e z & F. F e r n á n d e z : P r o t e í n a s i n t e g r a n t e s d e l o s o l i g ó m e r o s d e c a s e í n a s de la leche bovina se presenta en forma de polímeros de diferentes tamaños cubriendo la superficie de la micela (Dalgleish, 1998). La existencia de estos oligómeros debida a uniones sulfhidrilos entre moléculas de κ-caseína y otras proteínas puede explicarse por el hecho de que en la leche hay una considerable actividad enzimática cuya función primaria sería preservar la integridad de las uniones S-S intracatenarias e intercatenarias de moléculas con funciones enzimáticas o defensivas de la propia leche (Pepper y Farrell, 1982; Hamosh, 1995). En la bibliografía se ha encontrado información acerca de la existencia y composición de estos polímeros en lo relacionado a la leche de vaca, cabra y oveja. Existen diversos trabajos que hacen referencia a la unión entre κ-caseína y αs2-caseína como así también a la unión de la primera con proteínas del suero lácteo en diferentes condiciones, generalmente en ensayos o tratamientos industriales (Fox, 1982; Rassmusen y Petersen, 1991). En un trabajo anterior de nuestro grupo de trabajo (Hernández et al., 2001) se comprobó la presencia de oligómeros de caseína en la leche de varias especies de mamíferos pertenecientes a varios Ordenes y Familias, incluidas las de este trabajo. El objetivo del presente estudio fue determinar mediante cromatografía de partición y electroforesis la composición de los mencionados oligómeros en la leche de tres especies: venado de las pampas (Ozotocerus bezoarticus), elefante marino (Mirounga leonina) y cabra (Capra hircus) M AT E R I A L E S Y M É T O D O S Origen de las muestras.— Las muestras de venado de las pampas correspondían a animales que pertenecen a la Reserva de Vida Silvestre Campos del Tuyú, Fundación Vida Silvestre- General Lavalle, provincia de Buenos Aires. Las muestras de elefanta marina se obtuvieron de animales pertenecientes a la Reserva de la Península de Valdez, Chubut. Las muestras de cabras fueron obtenidas del INTA Leales, Tucumán y pertenecen a la raza Criolla. Métodos y Procedimientos.— En todos los casos se precipitaron las caseínas con buffer acetato de sodio 0,5 M, pH 4,3 y se centrifugaron en una microcentrífuga Rolco a 3000 rpm durante 10 minutos. Posteriormente se realizaron tres lavados con el mismo buffer y uno con agua destilada. El precipitado obtenido fue resuspendido a su volumen original de 0,5 ml con buffer Tris- HCl 1M pH 6,8. Antes de someter las caseínas obtenidas a cromatografía de partición se determinó su concentración mediante el método de Folin Ciocalteus (Lowry et al., 1955) Para la cromatografía se utilizó una columna de Sephacryl S-200 de 2,6 cm. de diámetro interno y 70 cm. de alto (C26/70 Pharmacia). La matriz se preparó en un volumen de 320 cm3 de buffer tris- HCl 0,1 M, NaCl 0,5 M, pH 8, luego se equilibró con el buffer utilizado en la calibración y corrida: fosfato de sodio 10 mM, NaCl 0,5 mM, urea 6 M, pH 8. La calibración de la columna se llevó a cabo empleando Dextran Blue (500 kDa), seroalbúmina bovina (66 kDa) y citocromo c (12,5 kDa). El eluído se recogió en un colector de fracciones automático Cygnet (Isco) a 0,5 ml/min, a razón de 5 ml por tubo y con una presión de 40 cm. de agua. En las fracciones obtenidas se midieron las concentraciones relativas de proteínas según Lowry et al., (1955). Posteriormente los picos resultantes se concentraron por diálisis contra polietilenglicol y se analizaron mediante electroforesis. Las electroforesis se efectuaron en geles de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio (PAGE-SDS) según el método descrito por Harris y Angal (1989). Éstas se efectuaron en dos condiciones diferentes, ausencia y presencia de agentes reductores (2-mercaptoetanol y ditiotreitol). Se utilizaron marcadores de peso molecular las siguientes proteínas: IgG de cabra (150 kDa), Seroalbúmina bovina (66 kDa), β-caseína bovina (30 kDa), α-lactalbúmina bovina (14 kDa). Los geles se escanearon con un Scanner Agfa SnapScan 370, se digitalizaron y se determinó la concentración de las bandas mediante el Software QuantiScan 3.0 (Biosoft, USA) Se llevaron a cabo dos tipos de análisis. En el primero se hicieron corridas electroforéticas de caseínas totales. El segundo consistió en la separación de las caseínas micelares mediante el pasaje por Sephacryl S-200 Acta zoológica lilloana 51 (1): 57–66, 2007 59 para venado de las pampas, tres principales de un total de cinco; y cuatro en total para elefante marino. El eluído correspondiente a cada uno de estos picos se sometió a PAGESDS en las dos condiciones descriptas en materiales y métodos. El análisis electroforético de los picos mencionados mostró bandas que diferían en número según que la electroforesis se haya realizado en presencia o ausencia de agentes reductores. Ello es particularmente notorio en los picos eluídos en primer término que corresponden a las proteínas más pesadas (los oligómeros mayores). Cuando éstos fueron sometidos a electroforesis en presencia de agentes reductores aparecieron solamente una o dos bandas, cuyas masas moleculares correspondían a los monómeros de caseína. En todos los casos se observó que el número de bandas era menor cuando la electroforesis se hizo en presencia de agentes reductores: los oligómeros de distintos pesos se resuelven en monómeros de menor peso. Debido a que el resultado de las electroforesis, efectuadas a partir de la separación cromatográfica previa, es diferente para cada especie, se analizan cada una de ellas por separado. κDa (+) y, efectuándose con las fracciones obtenidas electroforesis para conocer la composición de cada pico de elución. R E S U LTA D O S En la Fig. 1 se muestra un esquema de los geles de las corridas electroforéticas de las micelas precipitadas, o sea caseínas totales en presencia y ausencia de agentes reductores, en las tres especies de mamíferos. En ella se pueden observar los patrones de bandas de proteínas y a partir de éstas se pueden identificar las correspondientes a monómeros y o a oligómeros formados por puentes disulfuro. En presencia de agentes reductores el venado de las pampas y el elefante marino presentan: a) dos bandas principales de 29 y 33 kDa aproximadamente, y b) otras bandas menores con masas moleculares de 18 y 20 kDa, que son más notorias en el elefante marino. La cabra, en cambio tiene tres bandas principales, que corresponden a la α s1caseína, αs2- caseína y β-caseína; en estas condiciones la banda de κ-caseína queda enmascarada por la β-caseína. En ausencia de agentes reductores se observan, en las tres especies varias bandas de mayor masa molecular que corresponden a oligómeros de caseína. Estas se disponen en una distribución de tamaños que varía según la especie. A partir de su posición y de sus masas moleculares relativas se deduce que van desde dímeros a decámeros. Por técnicas de immunoblotting efectuados en un trabajo anterior (Hernández et al., 2001) se identificó a la k-caseína como parte constituyente de todos los oligómeros. En el segundo ensayo analítico las caseínas sometidas a cromatografía de filtración (Figura 2) evidenciaron varios picos, los cuales variaron en número según la especie. Los resultados mostraron que, en general, en todas las muestras los oligómeros de caseínas eluyen en el primer pico. Los restantes picos correspondieron a formas de menor masa molecular (monómeros principalmente y dímeros en algunos casos). A los picos mayores se los ha denominado, en cada una de las especies, picos principales. De esta manera se distinguen en la cabra (Figura 2) tres picos principales de un total de cuatro; (–) Figura 1. Esquema correspondiente a las corridas electroforéticas en PAGE-SDS de las caseínas de las tres especies. 1: Cn de cabra con agentes reductores. 2: Cn de cabra sin agentes reductores. 3: Cn de venado de las pampas con agentes reductores. 4: Cn de venado de las pampas sin agentes reductores. 5: Cn de elefante marino con agentes reductores. 6: Cn de elefante marino sin agentes reductores. 60 M . H e r n á n d e z d e S á n c h e z & F. F e r n á n d e z : P r o t e í n a s i n t e g r a n t e s d e l o s o l i g ó m e r o s d e c a s e í n a s Figura 2. Perfil cromatográfico de las caseínas de las tres especies estudiadas. Abscisa, número de tubo; el cero indica el inicio del volumen muerto Acta zoológica lilloana 51 (1): 57–66, 2007 61 CABRA La Figura 3 (PAGE-SDS) muestra las bandas correspondientes a cada uno de los picos sin el tratamiento con agentes reductores. En el primer pico aparecen una serie de bandas que van desde los 200 kDa a los 50 kDa aproximadamente, y que corresponden a los oligómeros de caseína. En el segundo pico se puede observar una banda intensa que correspondería a la αs2–caseína, otra de masa molecular menor correspondiente a la κ-Cn, y otra más difusa de ≅ 60 kDa que podría corresponder a un dímero, lo cual se discute mas adelante. En el tercer pico se ve una banda muy intensa de β-Cn y otra de α-Cn. El cuarto pico correspondería a péptidos de muy bajo peso molecular que no se detectan en las electroforesis. En la Figura 4 se muestra la electroforesis de los picos mencionados en el párrafo anterior, llevada a cabo en presencia de agentes reductores, En lo que corresponde al primer pico se evidencia una banda (la más intensa) de κ-caseína, y una de αs2–caseína. El segundo pico presenta una banda más intensa, probablemente αs2– caseína y otra, menos intensa, de κ-caseína. Cabe mencionar que no aparece la banda de 60 kDa, visible en el gel sin tratamiento reductor, por lo que se deduce que se trata de un dímero reducido a sus monómeros. El tercer pico no presenta grandes diferencias con respecto al ensayo sin tratamiento reductor, donde se observa una banda intensa de β-caseína y otra de intensidad menor y masa mayor correspondiente a α-Cn. VENADO DE LAS PAMPAS En la Figura 5 (PAGE-SDS sin agentes reductores) el primer pico muestra solamente una banda de alto masa molecular, que corresponde a un polímero de caseína, y no aparecen bandas en una gradación de tamaños como en la cabra. Para el segundo pico aparece una banda de peso intermedio (≅ 60 kDa), probablemente un dímero de caseína. El tercer pico presenta dos bandas, que por su peso corresponden a α-Cn y β-Cn. Cuando se sometieron las muestras al tratamiento con ME y DTT (Figura 6), el primer pico presenta dos bandas que probablemente correspondan, la más intensa a una caseína equivalente a la κ-caseína, y la más tenue a Figura 3. PAGE-SDS, sin agentes reductores correspondiente a la cromatografía de las caseínas de cabra. Los números romanos debajo de cada columna indican el pico de elución co-rrespondiente. Figura 4. PAGE-SDS, con agentes reductores correspondiente a la cromatografía de las caseínas de cabra. Cn: caseínas totales de cabra. Los números romanos debajo de cada columna indican el pico de elución correspondiente. Figura 5. PAGE-SDS, sin agentes reductores correspondiente a la cromatografía de las caseínas de venado de las pampas. MPM: Marcador de peso molecular. Los números romanos debajo de cada columna indican el pico de elución correspondiente. 62 M . H e r n á n d e z d e S á n c h e z & F. F e r n á n d e z : P r o t e í n a s i n t e g r a n t e s d e l o s o l i g ó m e r o s d e c a s e í n a s la αs2–caseína. En el segundo pico la banda que se manifiesta en forma más intensa podría corresponder a una αs2-caseína monomérica. También se nota la banda de 60 k Da que se observó en la corrida sin agentes reductores. En el pico número tres se observan dos bandas, tanto en presencia como en ausencia de agentes reductores. Los picos IV y V no mostraron bandas, por lo que se deduce que se trata de péptidos de muy bajo peso molecular. ELEFANTE MARINO En la Figura 7 se muestran los resultados de la electroforesis (PAGE-SDS) sin trata- miento reductor donde en el primer pico se puede observar solamente una banda de gran tamaño superior a 150 kDa correspondiente a un polímero de proteínas unidas por puentes disulfuro. La única banda del segundo pico podría ser homóloga a una α-caseína. Las cuatro bandas que se observan en el tercer pico probablemente corresponden a: β-caseína, αs2caseína, una banda de aproximadamente 60 kDa, y una proteína del lactosuero de unos 20 kDa. En el cuarto pico aparece una banda también atípica por su peso molecular de aproximadamente 18 kDa. Cuando se trata con agentes reductores en el primer pico aparece la banda de masa molecular atípica (≅ 60 kDa). Las bandas correspondientes a los picos dos, tres y cuatro no presentan diferencias producidas por el tratamiento con los agentes reductores (Figura 8). DISCUSIÓN Figura 6. PAGE-SDS, con agentes reductores correspondiente a la cromatografía de las caseínas de venado de las pampas. MPM: Marcador de peso molecular. Los números romanos debajo de cada columna indican el pico de elución correspondiente. Figura 7. PAGE-SDS: sin agentes reductores correspondiente a la cromatografía de las caseínas de elefante marino. MPM: Marcador de peso molecular. CnH: caseínas humanas. Los números romanos debajo de cada columna indican el pico de elución correspondiente. La ventaja de separar previamente por cromatografía de partición las muestras que contienen micelas de caseína consiste en que se pueden analizar —posteriormente por electroforesis— en forma separada las moléculas de mayor masa molecular respecto a las de menor masa. De hecho, la ventaja es mayor puesto que se pueden analizar independientemente cada uno de los picos mayores de proteínas eluídos de la columna cromatográfica. Para el caso del presente estudio esto permitiría determinar por cual o cuales de los monómeros estaban compuestos los oligómeros. Ello no sería posible trabajando con las muestras completas en las cuales los componentes monoméricos constituyentes de los oligómeros quedan enmascarados por sus homólogos (que son gran mayoría) que no formaban parte de las moléculas mayores. Se debe mencionar que la identificación de los monómeros se hace posible a partir de los dos siguientes hechos: en todos los mamíferos en los que se han llevado a cabo análisis de caseínas se ha demostrado que la única caseína glicosilada es la κ-caseína, por una parte y que la movilidad relativa de los cuatro tipos de caseína en los artiodáctilos y, con menos ejemplos, en otros Acta zoológica lilloana 51 (1): 57–66, 2007 63 teínas que los conforman aparecen como bandas individuales de menor peso. Tanto los polímeros que se observan en los geles sin agentes reductores como las proteínas que los integran son diferentes en las especies estudiadas. En la cabra lo que sucede es bastante similar a lo que ya se conoce sobre el particular en la vaca. La κ-caseína se une por puentes disulfuro con la αs2-caseína (Rasmussen y Petersen, 1991) y también consigo misma en una gradación de tamaños desde dímeros a decámeros (Talbot y Waugh, 1970; Groves et al., 1992). También al igual que en la vaca, pueden encontrarse en la cabra uniones de este tipo con la α-lactalbúmina, debido a las uniones S-S intracatenarias que ésta posee (Fox, 1982). La banda encontrada en esta especie de 60 kDa podría tratarse de un dímero de αscaseína formado por oxidación en contacto con el aire durante el proceso de concentración con polietilenglicol, lo que es poco probable, o de una molécula no caseínica que integra la micela. En el venado de las pampas no se forman polímeros entre caseínas y proteínas del lactosuero. Además no hay gradación de tamaño de los mismos, solo aparecen un dímero y un oligómero de muy alto peso molecular. Se puede observar claramente que hay una αs-caseína que forma parte de los polímeros mayores junto con la κ-caseína. Se puede suponer que se trata de una αs2-caseína por el hecho que el venado de las Ordenes de mamíferos es conocida y sirve como referencia. En las electroforesis con agentes reductores de las micelas de caseínas cuyos componentes no habían sido previamente separados cromatográficamente aparecen, fundamentalmente, bandas monoméricas de caseínas. En las muestras de cabra éstas están identificadas por: a) la movilidad electroforética de acuerdo a la información existente, b) la naturaleza glicosilada de la κ-caseína y c) el hecho que la β-caseína no está contenida entre los oligómeros debido a su carencia de grupos sulfhidrilos. Sobre todos estos hechos existe información de la literatura (Chianese et al., 1992; Richardson et al., 1973; Recio et al., 1997; Emi et al., 2004; Fernández y Hernández, 2006). Estas características son muy similares a las de caseínas bovinas homólogas. Hasta donde se ha podido comprobar no hay en la bibliografía información en la cual se hayan identificado los tipos de caseína del venado de las pampas. Por lo tanto en este trabajo se las han homologado con las caseínas de otras especies de rumiantes (cérvidos y bóvidos) según los criterios mencionados anteriormente. En este sentido se sabe que la movilidad relativa de las caseínas del ciervo europeo es similar a las de bovinos (Bos taurus, Poëphagus mutus), antilopinos (Antidorcas marsupialis) y caprinos (Capra hircus, Ovis aries) (Emi et al., 2004; Ginger et al., 1999; Osthoff et al., 2007). En lo relacionado con el elefante marino los antecedentes sobre el tema también indican que existe una cierta homología con otros otaridos y fócidos, como así también con artiodáctilos (Cane et al., 2005; Dosako et al., 1982; Ronayne de Ferrer et al., 1996) que se refleja en una similar migración de los tipos de caseínas. Cuando las caseínas son sometidas a cromatografía de partición en presencia de urea éstas se separan en todos sus componentes. En los primeros picos de las muestras eluyen los polímeros de caseína de mayor tamaño. Estos están formados por puentes disulfuro de las caseínas, entre sí y con otras proteínas. Cuando se rompen estas uniones por medio de los agentes reductores (lo que ocurre en las electroforesis de este tipo) las pro- Figura 8. PAGE SDS con agentes reductores correspondientes a la cromatografía de las caseínas de elefante marino. I: Pico I; II: Pico II; III: Pico III. 64 M . H e r n á n d e z d e S á n c h e z & F. F e r n á n d e z : P r o t e í n a s i n t e g r a n t e s d e l o s o l i g ó m e r o s d e c a s e í n a s pampas es un artiodáctilo en el que, al igual que en la vaca, esta caseína tiene la característica de formar puentes disulfuro. Esto se debe a la presencia de cisteína en su estructura (Jenness, 1982; Rasmussen y Petersen, 1991). Cabe aclarar que recientemente en la leche humana se ha encontrado αs1-caseína que posee 3 residuos de cisteína en su molécula y forma puentes disulfuro con la κ-caseína (Sörensen et al., 2003). Como se sabe, la leche de los mamíferos marinos es bastante diferente al resto de los mamíferos, presenta características propias, como el hecho de carecer de lactosa, tener alto contenido de lípidos y alta concentración de proteínas (Oftedal, 1984), como así también peculiaridades en la transmisión de la inmunidad neonatal (Marquez et al., 1995). Por lo que hemos podido observar en el presente trabajo las caseínas también presentan características propias. Solo aparecen polímeros de muy alto peso molecular, que cuando son descompuestos por los agentes reductores, dan lugar a bandas monoméricas bastante particulares. La más conspicua es una banda tipo κ-caseína, por su capacidad de auto asociarse por puentes disulfuro, y por tener una masa molecular muy alta (60 kDa). Las bandas correspondientes a los otros tipos de caseínas no participan de la formación de los polímeros. Además es muy notoria la aparición de una proteína que se comporta como caseína y que tiene una masa molecular muy baja (18 kDa), que no es homologable a ninguna conocida. A partir de los resultados obtenidos se tiene la fuerte impresión que es necesario redefinir algunos de los conceptos relacionados con la actividad de la sulfhidril-oxidasa comprometida en el mantenimiento de los enlaces disulfuro entre las cadenas peptídicas. A partir de la poca información sobre el tema se sostiene que la existencia de oligómeros de caseínas se debería a una cierta inespecificidad de la enzima que le permite actuar sobre distintos tipos de proteínas, lo que constituiría un subproducto de la actividad principal. Quizás el mecanismo se base en este hecho, pero facilitado por uno ó más de los aspectos siguientes. Dado que la mayor parte de los oligómeros encontrados corresponden a las propias caseínas, sean mo- léculas de κ-Cn ó α-Cn, se debe considerar que esta susceptibilidad a la actividad enzimática podría ser debida a: la especial estructura abierta que tienen estas moléculas, a una disposición específica de la enzima respecto a esta estructuras, ó a la existencia de una molécula oxidante intermediaria más pequeña que actuaría sobre proteínas que se encuentran normalmente adosadas, como es el caso de las caseínas en su conformación micelar. Hasta ahora no hemos encontrado que otras moléculas reconocidamente portadoras de enlaces disulfuro, como es, por ejemplo, el caso de las inmunoglobulinas, se encuentren formado parte de los oligómeros, puesto que las proteínas no-caseínicas observadas tienen pesos diferentes a los de las cadenas livianas y pesadas de estas proteínas. De hecho, como se ha señalado, no pasa de tres el número de proteínas no-caseínicas que integran los oligómeros, y cada una de ellas es distinta en cada especie. Se plantea así la cuestión de si la existencia de oligómeros es un hecho secundario y accidental de esta actividad enzimática ó si su presencia implica un valor adaptativo seleccionado evolutivamente. Este es un nuevo problema y por ahora permanece abierto a nuevos hallazgos. CONCLUSIONES Independientemente de los tipos de caseínas monoméricas que presentan las diferentes especies, se forman oligómeros unidos por puentes disulfuro. La composición de los oligómeros es diferente en las distintas especies. Al parecer las diferencias que se observan entre las especies en estos dos aspectos no tienen influencia sobre la formación de las micelas ni la estabilidad de las mismas. AGRADECIMIENTOS A los siguientes profesionales por su aporte en la provisión de las muestras de leche utilizadas en este trabajo: Dra. Marcela Uhart, Dra. Myrta Lewis, Dr. Claudio Campagna, Dr. Alejandro Vila. Al personal del INTA Leales, Tucumán. Al personal de la Fundación Miguel Lillo que nos colaboró. Acta zoológica lilloana 51 (1): 57–66, 2007 65 milk proteins”. In: Developments in dairy chemistry – 1: Proteins. [P. F. Fox, Editor]. Applied Science Publishers. London and New York. Jensen, R. G. 1995. Handbook of milk composition. Academic Press, San Diego, CA, USA. Lowry, O. H.; N. J. Rosenbrough; A. L. Farr & R. J. Randall. 1955. “Protein measurement with the Folin phenol reagent”. Journal of Biological Chemistry. 193: 265-275. Marquez, M. E.; N. H. Slobodianik; P A. Rona. yne de Ferrer; A. R. Carlini; D. F. Vergani & G. A. Daneri. 1995. Immunoglobulin A levels in southern elephant seal (Mirounga leonina) milk during the suckling period. Comparative Biochemistry and Physiology Part B. 112: 569-572. Oftedal, O. T. 1984.“Milk compositions, milk yield and energy output at peak lactation: Comparative review”. 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